大鼠原代细胞传代方法： 一、贴壁细胞的消化法传代 1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。 2、加入1ml左右消化液（与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 二、悬浮细胞的传代 1、直接传代 1）让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。 2）用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。 2、离心法传代 1）将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1000rpm，5分钟。 2）去除上清，加新的培养液一离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。 3）将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。 大鼠原代细胞培养中的5个常见错误 错误1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间 纠正1：原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。 错误2：解冻小瓶后直接离心原代细胞 纠正2：我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。 错误3：允许原代细胞变得过于融合 纠正3：当生长至100汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95％融合时，对原代细胞进行传代培养。 |