免疫印记套装的操作要点和安全注意事项
Quick免疫印记套装(转膜液、封闭液、抗体稀释液、洗涤液)是一种包含了Westernblot实验过程中常用的新一代改良的快速转膜液、无蛋白快速封闭液、抗体稀释液(通用型)以及洗涤液组成的溶液套装。转膜液、封闭液和抗体稀释液效果优于传统的同类产品,具有使用时间短、兼容性好、特异性高、安全无毒害等优点,大大缩短了Westernblot实验时间,节省实验成本。
本产品含10×快速转膜液500mL、封闭液100mL、抗体稀释液200mL、10×洗涤液100mL,可以进行10张NC膜/PVDF膜的转印实验。
免疫印记套装操作要点
1.膜操作:只用平头镊子夹膜边角,严禁触碰膜蛋白面,防止手印、划痕;PVDF膜需甲醇活化,全程保持湿润,膜一旦干了极易产生高背景,实验基本报废。
2.转膜:快速转膜液要按说明书稀释;根据目的蛋白分子量调整转膜时间,小分子蛋白容易转穿膜,大分子容易转膜不足;胶和膜之间不能留气泡,否则出现空白条带。
3.封闭:套装自带无蛋白封闭液,无需再用脱脂牛奶;做磷酸化蛋白优先使用本封闭液,牛奶内磷酸蛋白会造成假阳性。
4.抗体孵育:直接用套装抗体稀释液稀释一抗/二抗;4℃一抗孵育过夜,二抗室温1h;摇床低速温和晃动,保证膜完全浸没。
5.洗膜:10×洗涤液稀释成1×TBST;每次孵育结束洗膜3次,每次5–10min,充分洗去游离抗体,减少背景。
6.本套装只提供缓冲液,电泳胶、蛋白Marker、PVDF膜、一抗二抗、ECL发光液需要单独采购。
免疫印记套装安全注意
1.仅限科研人员操作,穿实验服、戴手套,避免试剂接触皮肤、眼睛;一旦接触大量清水冲洗。
2.试剂不可用于人体/动物诊断、食品药品检测。
3.废液按实验室生化废液规范处理,不可直接倾倒。